什么是熒光濾光片?
熒光濾光片是應(yīng)用于生物醫(yī)學和生命科學儀器的關(guān)鍵元件,主要作用是在熒光顯微光學系統(tǒng)中篩選激發(fā)光與發(fā)射光的特征波段光譜。
熒光濾光片的真面目
濾光片具體在什么位置呢,這個四四方方的黑色小模塊就是今天的主角,它就放在顯微鏡的熒光轉(zhuǎn)盤里,稱為熒光濾鏡組(fluorescence filter cube)。
? 熒光濾鏡組主要由激發(fā)濾光片、分色鏡和發(fā)射濾色片組成。
舉例:▉ 440-490激發(fā)光; ▉ 500進行分光; ▉ 收集500-550的信號
? 激發(fā)濾色片(EX):只能讓特定波段的激發(fā)光通過
? 發(fā)射濾色片(EM):進一步過濾掉未被分色鏡濾掉的激發(fā)光和其它雜散光
? 分色鏡(BS):將激發(fā)光反射后照射到樣品上,它只允許樣品發(fā)射的熒光透過,經(jīng)發(fā)射濾色片進入目鏡或者CCD
熒光濾片的常見分類
簡單來說濾光片通常有三種方式篩選波段,分別是BP、LP、SP。同時根據(jù)實際應(yīng)用又可分為單通和多通濾光片。
? 帶通濾光片BP(band-pass filter)
允許某個范圍內(nèi)波段的熒光通過,比如下圖中紅線所示BP 420-450nm ,表示只能420-450nm的熒光通過,這種類型的濾光片被稱為帶通濾光片。是最為常見的。
長通濾光片LP(Long-pass filter)
允許長于某個波段的熒光通過,比如下圖中紅線所示LP 510 nm ,表示長于510nm的熒光通過,這種類型的濾光片被稱為長通濾光片。
短通濾光片SP(Short-pass filter)
允許短于某個波段的熒光通過,比如下圖中藍線所示SP 1064nm,表示短于1064nm的光通過, 這種類型的濾光片被稱為短通濾光片。短通濾光片在普通的熒光顯微鏡中并不常見。
單通熒光片(Single Band Filter)
比如典型的單通熒光濾鏡組FITC,激發(fā)濾色片和發(fā)射濾色片都只有一個帶通(長通或短通),通常只激發(fā)和篩選FITC及相近染料的熒光,在實際應(yīng)用中,單通濾片是最常用到的。
多通熒光片( Multi Band Filter )
是指激發(fā)濾色片和發(fā)射濾色片都具有多個帶通(長通或短通),比如下圖所示,可以同時激發(fā)DAPI、FITC和Texas Red。
在實際應(yīng)用中,多通濾片比較適合直接用眼睛觀察,如果用于成像很大機率會出現(xiàn)串色現(xiàn)象。
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