嘔吐毒素檢測(cè)試劑盒 |
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嘔吐毒素檢測(cè)試劑盒 使用說(shuō)明書(shū) (酶聯(lián)免疫法) 1嘔吐毒素檢測(cè)試劑盒原理及用途 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇又稱嘔吐毒素,由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生,常出現(xiàn)在玉米(穗腐病)、小麥和大麥(赤霉病)上。我國(guó)谷物中DON的標(biāo)準(zhǔn)為1.0mg/kg。 本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)大米、小米、面等谷物及飼料樣本中的嘔吐毒素(Deoxynivalenol,DON),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液,樣本中的嘔吐毒素和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗嘔吐毒素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含嘔吐毒素含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中嘔吐毒素的殘留量。 2技術(shù)指標(biāo) 2.1試劑盒靈敏度:10ppb(ng/ml) 2.2反應(yīng)模式:25℃,30~15min 2.3檢測(cè)下限: 谷物、飼料…………………………………200ppb 2.4交叉反應(yīng)率: 嘔吐毒素……………………………………100% 3-乙;撗跹└牭毒┐肌<1% 2.5樣本回收率: 谷物、飼料……………………………85%±15% 3試劑盒組成 酶標(biāo)板………………………………………96孔 標(biāo)準(zhǔn)品(黑蓋):各1ml 0ppb、10ppb、30ppb、90ppb、270ppb、810ppb 酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml 抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml 底物液A(白蓋)……………………6ml 底物液B(黑蓋)……………………6ml 終止液(黃蓋)………………………6ml 20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml 復(fù)溶液(黃蓋)………………………50ml 說(shuō)明書(shū)…………………………………1份 蓋板膜…………………………………1張 自封袋…………………………………1個(gè) 4需要的器材和試劑 4.1儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g) 4.2微量移液器:?jiǎn)蔚?0?l-200?l,100?l-1000?l、多道300?l 5樣本前處理 5.1樣本處理前須知: 實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 5.2配液 配液1:工作洗滌液 將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。 5.3樣本前處理步驟: 5.3.1谷物(大米、玉米、小米、麥麩等)及飼料處理方法 1)稱取2g±0.05g粉碎樣本于50ml離心管中,加20ml去離子水,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘; 2)取0.5ml上清,加入0.5ml復(fù)溶液,混勻; 3)取50?l進(jìn)行分析。 樣本稀釋倍數(shù):20檢測(cè)下限:200ppb 注:由于毒素在樣本中的分布呈非均勻狀態(tài),取樣時(shí)需多點(diǎn)取樣充分混勻后再取2g進(jìn)行試驗(yàn)。 6酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟 將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上,洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。 6.1編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。 6.2加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50?l/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50?l/孔,再加入50?l/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。 6.3洗滌:小心揭開(kāi)蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350?l工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。 6.4顯色:每孔加入底物液A 50?l,再加底物液B 50?l,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過(guò)淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間)。 6.5終止:每孔加入終止液50?l,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。 6.6測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。 7結(jié)果分析 7.1百分吸光率的計(jì)算 標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即 百分吸光度值(%)=A/A0×100% A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值 7.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。 若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來(lái)電索取) 8注意事項(xiàng) 8.1室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。 8.2在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。 8.3混合要均勻,洗板要che底,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。 8.4在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。 8.5不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。 8.6顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。 8.7反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。 9貯藏及保存期 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。 保質(zhì)期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。 http://www.shyanzun.com/Products-37608388.html https://www.chem17.com/st483348/product_37608388.html |
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